CCDC109B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412415-ACT

MCUB（CCDC109B）は、ミトコンドリアカルシウムユニポーター（MCU）複合体の調節サブユニットをコードしており、ミトコンドリア内膜を介したCa2+流入を調節するとともに、ミトコンドリアのバイオエネルゲティクスやCa2+依存的シグナル伝達の微調整に寄与します。CCDC109BはMCUチャネル活性の負の調節因子として作用することで、酸化的リン酸化、活性酸素種（ROS）のバランス、ならびに細胞質Ca2+トランジェントとミトコンドリア代謝の連関に影響を及ぼします。ユニポーター制御の変化は、細胞ストレス応答の破綻やミトコンドリアダイナミクスのリモデリングと関連づけられており、これらは増殖性および神経変性の表現型に関わる過程です。そのため、ヒト細胞におけるMCUB/CCDC109Bは、ミトコンドリアCa2+恒常性、代謝リプログラミング、そしてCa2+駆動性の転写プログラムという文脈で研究されています。

CCDC109B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MCUBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CCDC109B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MCUB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMCUB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CCDC109Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMCUB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCCDC109B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMCUB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCCDC109B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。