Plásmido CRISPR de Activación (h) CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2: sc-401054-ACT

CNR2 codifica el receptor cannabinoide 2 (CB2), un GPCR acoplado a Gi/o expresado predominantemente en linajes inmunitarios y hematopoyéticos, que modula el tono inflamatorio y la migración de las células inmunes. Tras su activación, CB2 inhibe la adenilil ciclasa para reducir la señalización de cAMP/PKA y puede activar las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT, configurando la producción de citocinas, la quimiotaxis y los programas de supervivencia. La señalización de CB2 se entrecruza con redes de mediadores lipídicos y con el metabolismo de los endocannabinoides, influyendo en los estados de activación de macrófagos y microglía y en respuestas inmunes innatas y adaptativas más amplias. La expresión o señalización desregulada de CNR2 se ha asociado con inflamación mediada por el sistema inmune, procesos neuroinflamatorios y la dinámica del microambiente tumoral-inmune, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en investigación en inmunología y neurobiología.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CNR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CNR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CNR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CNR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 en células tumorales con expresión de CNR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.