Plasmide CRISPR/Cas9 KO CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 (h2): sc-400648-KO-2

Présentation

CNR1 code pour le récepteur cannabinoïde 1 (CB1), un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) principalement neuronal, qui transmet les signaux endocannabinoïdes afin de réguler la libération des neurotransmetteurs et la plasticité synaptique. CB1 se couple surtout aux protéines Gi/o pour inhiber l’adénylate cyclase, moduler la signalisation AMPc/PKA et activer les voies MAPK/ERK, tout en influençant l’activité des canaux ioniques et la dynamique calcique présynaptique. Par ces mécanismes, CB1 contribue au contrôle, à l’échelle des circuits, de la récompense, de la nociception, de l’appétit, de la réactivité au stress et de la neuro-inflammation. Une signalisation CNR1 dérégulée a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et à des traits métaboliques, ce qui en fait un nœud moléculaire pertinent pour l’étude de la communication cerveau–corps et du contrôle homéostatique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CNR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CNR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CNR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CNR1 pour l'étude de la signalisation de CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CNR1 essentiels à la fonction de CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CNR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CNR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 plasmide HDR (h) et le CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CNR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CNR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.