Plasmide CRISPR d'Activation (m) CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1: sc-419722-ACT

Le gène murin Cnr1 code le récepteur cannabinoïde 1 (CB1/CNR1), un RCPG couplé à Gi/o qui répond aux endocannabinoïdes tels que l’anandamide et le 2‑arachidonoylglycérol afin de réguler la transmission synaptique et la signalisation neuroendocrinienne. L’activation de CB1 inhibe généralement l’adénylate cyclase et la voie AMPc/PKA, module les voies MAPK/ERK et contrôle l’activité des canaux ioniques pour ajuster finement la libération de neurotransmetteurs et l’excitabilité neuronale. Dans le SNC, CNR1 est au cœur de processus neuromodulateurs incluant la récompense, la nociception, l’appétit, la réactivité au stress, ainsi que l’apprentissage et la mémoire, avec des rôles supplémentaires dans des voies périphériques de signalisation liées au métabolisme et à l’immunité. Une signalisation CNR1 altérée est fréquemment étudiée dans des modèles murins en lien avec des phénotypes neuropsychiatriques, des voies associées à la douleur et une dérégulation métabolique.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cnr1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cnr1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cnr1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cnr1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cnr1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.