Plásmido CRISPR de Activación (h) caveolin-1: sc-400102-ACT

El CAV1 humano codifica la caveolina-1, una proteína integral de membrana con función de andamiaje, esencial para la formación de caveolas y la organización de balsas lipídicas ricas en colesterol en la membrana plasmática. La caveolina-1 coordina la transducción de señales y el tráfico de membrana al modular las tirosina quinasas receptoras, la señalización de GPCR, la adhesión dependiente de integrinas y vías posteriores como PI3K–AKT, MAPK y la señalización eNOS/NO. A través de sus funciones en endocitosis, mecanotransducción y remodelación del citoesqueleto, CAV1 influye en la proliferación, la migración y la homeostasis metabólica en muchos tipos celulares. La alteración de la expresión de caveolina-1 y de la dinámica de las caveolas se ha vinculado con la biología del cáncer, la fibrosis, la disfunción cardiovascular y la resistencia a la insulina, lo que la convierte en un nodo útil para el análisis de vías en modelos relevantes de enfermedad.

caveolin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAV1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

caveolin-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAV1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAV1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de caveolin-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAV1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de caveolin-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía caveolin-1 en células tumorales con expresión de CAV1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.