Plásmido Doble Nickase (h) cathepsin E: sc-403406-NIC

CTSE codifica la catepsina E humana, una proteasa aspártica intracelular localizada principalmente en compartimentos endosómicos y lisosomales, donde contribuye al procesamiento proteolítico de proteínas internalizadas y de antígenos peptídicos. Al modular la red de proteasas endolisosomales, la catepsina E influye en la presentación de antígenos, la homeostasis epitelial y la señalización inflamatoria, con vínculos funcionales con la biología de la mucosa gástrica y la activación de células inmunitarias. Se han descrito alteraciones en la expresión de CTSE y en la actividad de esta proteasa en múltiples contextos fisiopatológicos, incluidos el daño mucoso, la inflamación y la remodelación de la proteólisis asociada al cáncer. Estas características hacen de CTSE un nodo útil para estudiar la proteostasis asociada a lisosomas, las vías de procesamiento de antígenos y la desregulación de proteasas relevante para la enfermedad.

cathepsin E El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CTSE en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CTSE. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CTSE. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CTSE alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.