Plasmide Double Nickase (h) cathepsin C: sc-401814-NIC

CTSC code la cathepsine C, une dipeptidyl-peptidase cystéinique lysosomale qui enlève des dipeptides en N‑terminal afin d’activer plusieurs protéases à sérine des granules dans les cellules de la lignée myéloïde. Par son rôle dans la maturation protéolytique, la cathepsine C influence les fonctions effectrices de l’immunité innée, la signalisation inflammatoire et des cascades protéasiques régulées au sein du compartiment endolysosomal. L’activité de CTSC est étroitement liée à la biologie des neutrophiles et des macrophages, en modulant des voies impliquées dans la défense de l’hôte, le remodelage tissulaire et la signalisation dépendante des protéases. La dérégulation de CTSC a été associée à des phénotypes immunitaires et inflammatoires et constitue un point d’entrée mécanistique pour étudier, dans des contextes cellulaires pertinents pour la maladie, les perturbations des réseaux de protéases.

cathepsin C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTSC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTSC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTSC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTSC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.