Plásmido Doble Nickase (m) cathepsin B: sc-419873-NIC

El gen Ctsb de ratón codifica la catepsina B, una proteasa cisteínica lisosomal que media el recambio intracelular de proteínas y contribuye a la proteólisis endosomal-lisosomal, la autofagia y el procesamiento de antígenos. Más allá de los lisosomas, la catepsina B puede influir en la remodelación de la matriz extracelular a través de redes de proteasas, modulando la migración celular y programas de remodelación tisular. La actividad desregulada de la catepsina B se ha asociado con señalización inflamatoria, defectos de proteostasis vinculados a la neurodegeneración y la remodelación del microambiente tumoral en modelos experimentales, lo que convierte a Ctsb en un objetivo frecuentemente utilizado para estudiar patología dependiente de proteasas. Como parte de la familia más amplia de las catepsinas, se conecta con vías que controlan la biogénesis lisosomal, la maduración del fagosoma y mecanismos de muerte celular ligados a la permeabilización de la membrana lisosomal.

cathepsin B El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ctsb en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ctsb. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ctsb. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ctsb alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.