Plásmido Doble Nickase (h) cathepsin B: sc-400360-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)cathepsin B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa cathepsin B (h) y el plásmido de doble nickasa cathepsin B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CTSB. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cathepsin B Anticuerpo (H-5): sc-365558
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) cathepsin B | sc-400360-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) cathepsin B | sc-400360-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTSB codifica la catepsina B, una proteasa cisteínica lisosomal que impulsa el recambio intracelular de proteínas y contribuye al procesamiento de antígenos, a la dinámica de autofagia-lisosoma y a la remodelación de la matriz extracelular tras su secreción o la fuga lisosomal. La actividad de la catepsina B se interseca con el tráfico endo-lisosomal, las respuestas asociadas al inflamasoma y las redes de proteasas que configuran la invasión celular y las señales de supervivencia. La expresión o actividad desregulada de CTSB se ha vinculado con la progresión tumoral y la biología de la metástasis, procesos neurodegenerativos y daño tisular inflamatorio mediante la alteración de la proteostasis y la señalización proteolítica. Como un nodo de proteasas abordable experimentalmente, CTSB se estudia ampliamente por sus funciones en mecanismos de muerte celular dependientes de lisosomas y en la remodelación mediada por proteasas en modelos relevantes para enfermedades.
cathepsin B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CTSB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CTSB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CTSB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CTSB alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.