Plasmide CRISPR d'Activation (h) caspase-6: sc-402563-ACT

CASP6 code la caspase-6, une protéase cystéine-aspartate qui agit comme caspase effectrice dans la mort cellulaire régulée et le remodelage protéolytique des substrats cellulaires. L’activité de la caspase-6 contribue à la signalisation apoptotique en aval des caspases initiatrices et s’inscrit à l’interface de voies contrôlant l’intégrité du cytosquelette, la maturation de protéines nucléaires et la protéostasie sensible au stress. Des altérations de l’expression ou de l’activation de CASP6 ont été associées à des processus neurodégénératifs, à des contextes de signalisation inflammatoire et à des phénotypes liés à l’apoptose observés en biologie du cancer. En tant que nœud au sein des cascades de caspases, la caspase-6 est fréquemment utilisée pour étudier des mécanismes dépendants du clivage qui façonnent les décisions de destin cellulaire et l’homéostasie tissulaire.

caspase-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASP6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

caspase-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASP6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASP6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de caspase-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASP6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de caspase-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie caspase-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de CASP6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.