Plásmido Doble Nickase (m) caspase-1: sc-419461-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)caspase-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa caspase-1 (m) y el plásmido de doble nickasa caspase-1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Casp1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: caspase-1 Anticuerpo (D-3): sc-392736
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) caspase-1 | sc-419461-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) caspase-1 | sc-419461-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Casp1 de ratón codifica la caspasa-1, una proteasa de cisteína que se activa dentro de complejos inflamasoma como NLRP3, AIM2 y NLRC4 en respuesta a productos microbianos y al estrés celular. La caspasa-1 activa escinde pro-IL-1β y pro-IL-18 para generar citocinas maduras y procesa la gasdermina D para impulsar la muerte celular piroptótica, vinculando el reconocimiento inmunitario innato con la salida inflamatoria. Esta vía se entrecruza con el cebado mediado por NF-κB, la disfunción mitocondrial, los flujos iónicos y la señalización por especies reactivas de oxígeno, modulando las respuestas inmunitarias de macrófagos y células epiteliales. La actividad desregulada de la caspasa-1 se ha implicado en modelos de enfermedad autoinflamatoria, inflamación asociada a sepsis, neuroinflamación e inflamación metabólica, lo que convierte a Casp1 en un nodo clave para estudios mecanísticos.
caspase-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Casp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Casp1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Casp1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Casp1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.