Plásmido Doble Nickase (h) casein kinase Iε: sc-402163-NIC

CSNK1E codifica la caseína quinasa Iε (CK1ε) humana, una quinasa de serina/treonina que fosforila diversos sustratos para coordinar el ritmo circadiano, el tráfico de receptores y la transducción de señales. CK1ε es un modulador clave de la señalización Wnt/β-catenina mediante la fosforilación de Dishevelled y otros componentes de la vía, y también contribuye a las respuestas al daño del ADN y al control del ciclo celular a través del recambio proteico dependiente de fosforilación. A través de estas funciones, CSNK1E influye en programas transcripcionales, la estabilidad de proteínas y la dinámica del citoesqueleto que determinan la proliferación y la diferenciación. La actividad desregulada de CK1ε se ha relacionado en la literatura con fenotipos circadianos alterados y con desequilibrios de señalización observados en múltiples contextos de enfermedad, incluida la reconfiguración de vías asociada al cáncer.

casein kinase Iε El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSNK1E en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSNK1E. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSNK1E. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSNK1E alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.