Plasmide CRISPR d'Activation (h) casein kinase Iδ: sc-401839-ACT

CSNK1D code la caséine kinase Iδ (CK1δ) humaine, une protéine kinase sérine/thréonine qui phosphoryle une grande diversité de substrats afin de coordonner la synchronisation de l’horloge circadienne, la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et le trafic vésiculaire. CK1δ contribue à des réseaux de transduction du signal, notamment les voies Wnt/β-caténine et Hedgehog, via un contrôle dépendant de la phosphorylation de la stabilité, de la localisation et du renouvellement des substrats. En modulant la phosphorylation de protéines de l’horloge et de signalisation, CSNK1D influence les rythmes transcriptionnels et la protéostasie, des processus fréquemment perturbés dans les troubles prolifératifs et neurobiologiques. Une activité dérégulée de CK1δ a été associée à des phénotypes circadiens altérés et à des sorties de signalisation aberrantes qui recoupent des voies liées à l’oncogenèse et à la neurodégénérescence.

casein kinase Iδ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSNK1D sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

casein kinase Iδ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSNK1D dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSNK1D, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de casein kinase Iδ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSNK1D natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de casein kinase Iδ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie casein kinase Iδ dans les cellules tumorales présentant une expression de CSNK1D silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.