Plásmido Doble Nickase (h) casein kinase Iα: sc-400898-NIC

CSNK1A1 codifica la caseína quinasa Iα humana, una quinasa de serina/treonina que fosforila diversos sustratos para regular la transducción de señales y el recambio de proteínas. La caseína quinasa Iα participa en el control de la vía Wnt/β-catenina mediante la fosforilación de componentes de esta vía, y también contribuye a la regulación del ritmo circadiano, las respuestas al daño del ADN y las redes de fosforilación asociadas al ciclo celular. Al modular la estabilidad y la localización de proteínas señalizadoras clave dependientes de la fosforilación, CSNK1A1 influye en programas transcripcionales y en la homeostasis celular. La desregulación de la actividad o la expresión de CSNK1A1 se ha relacionado con alteraciones de la señalización Wnt y con perturbaciones más amplias de los programas de proliferación y diferenciación relevantes para la biología del cáncer y los procesos del desarrollo.

casein kinase Iα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSNK1A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSNK1A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSNK1A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSNK1A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.