Plásmido CRISPR de Activación (h) CASC3: sc-411606-ACT

CASC3 (también conocido como MLN51) codifica un componente central del complejo de unión a exones (exon junction complex, EJC), que se deposita sobre el ARNm tras el empalme y coordina la regulación génica posranscripcional. Mediante interacciones con factores como EIF4A3, MAGOH y RBM8A, CASC3 contribuye a la vigilancia del ARNm y a la degradación mediada por codones de terminación prematuros (nonsense-mediated mRNA decay, NMD), influyendo en la estabilidad, la exportación y la traducción de los transcritos. Estas funciones sitúan a CASC3 en vías que controlan el control de calidad del ARN y la homeostasis del proteoma, con efectos posteriores sobre programas del estado celular, incluida la proliferación y la diferenciación. La desregulación de la actividad del EJC y de la degradación del ARNm se ha asociado con firmas de expresión génica aberrantes observadas en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda el uso de CASC3 como un nodo mecanístico para estudios de biología del ARN.

CASC3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CASC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CASC3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CASC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CASC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CASC3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CASC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CASC3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CASC3 en células tumorales con expresión de CASC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.