Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406552

Übersicht

CBR3 kodiert die Carbonylreduktase 3, eine zytosolische, NADPH‑abhängige Oxidoreduktase, die die Reduktion reaktiver Carbonylverbindungen katalysiert, darunter Aldehyde und Ketone, die während des Xenobiotika‑Metabolismus und bei oxidativem Stress entstehen. Durch die Modulation des zellulären Redoxgleichgewichts und der Entgiftung von Carbonylverbindungen trägt CBR3 zu Stoffwechselprozessen der Phase I/II bei und hilft, die Anreicherung elektrophiler Zwischenprodukte zu begrenzen, die Proteine, Lipide und DNA schädigen können. Unterschiede in der CBR3‑Aktivität wurden im Zusammenhang mit der unterschiedlichen Verarbeitung endogener Lipidperoxidationsprodukte und verschiedener niedermolekularer Substrate untersucht, wodurch dieses Enzym mit Signalwegen verknüpft ist, die für Stressantworten und metabolische Anpassung relevant sind. Eine veränderte Carbonylreduktase‑Aktivität wird häufig in Modellen der Krebsbiologie, Pharmakologie und Toxikologie untersucht, in denen Redoxzustand und Metabolitenverarbeitung das Zellüberleben und den Phänotyp beeinflussen.

Das Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CBR3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CBR3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CBR3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Carbonyl reductase 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CBR3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Carbonyl reductase 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CBR3-Exone abzielen, die für die Carbonyl reductase 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CBR3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Carbonyl reductase 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CBR3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Carbonyl reductase 3 HDR-Plasmid (h) und Carbonyl reductase 3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CBR3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CBR3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.