Cappuccino Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407008

Descripción general

El gen humano **BLOC1S4** codifica **cappuccino**, un componente central del **complejo 1 de biogénesis de orgánulos relacionados con los lisosomas (BLOC-1)**, que coordina el tráfico de membranas endosomales y la clasificación de carga necesarios para la maduración de orgánulos especializados. La función de BLOC-1 favorece la gemación de vesículas, el reciclaje y la entrega de carga proteica a través del sistema endosoma–lisosoma, afectando procesos como la biogénesis de gránulos de pigmento y las vías secretoras en células especializadas. La alteración de subunidades de BLOC-1 perturba el transporte intracelular y la dinámica vesicular, con relevancia para trastornos que implican orgánulos relacionados con los lisosomas y para fenotipos neurodelimentales y sinápticos más amplios vinculados a disfunción del tráfico endosomal. En consecuencia, **BLOC1S4** se estudia comúnmente en el contexto de la clasificación endosomal, la biogénesis de orgánulos y las consecuencias a nivel de vías derivadas de alteraciones en el tráfico de membranas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cappuccino (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BLOC1S4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BLOC1S4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BLOC1S4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cappuccino.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BLOC1S4 para la investigación de la señalización de Cappuccino, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BLOC1S4 críticos para la función de Cappuccino
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BLOC1S4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cappuccino CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cappuccino CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BLOC1S4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cappuccino (h) y el plásmido HDR Cappuccino (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BLOC1S4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BLOC1S4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.