CAML Double Nickase Plasmid (h): sc-403690-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CAML Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CAML Double-Nickase-Plasmid (h) und CAML Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CAMLG abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CAML: sc-166557
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CAML Double Nickase Plasmid (h) | sc-403690-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CAML Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403690-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CAMLG kodiert den calcium‑modulierenden Cyclophilin‑Liganden (CAML), ein mit der Membran des endoplasmatischen Retikulums assoziiertes Protein, das als Regulator der intrazellulären Ca²⁺‑Signalübertragung und der Biogenese von Membranproteinen fungiert. CAML ist an Prozessen beteiligt, die mit rezeptorvermitteltem Calciumeinstrom, ER‑Homöostase sowie dem Transport oder der Stabilisierung ausgewählter Membranproteine verknüpft sind, und beeinflusst dadurch nachgeschaltete Signalwege, die Zellaktivierung, Überleben und Stressantworten steuern. Es wurde im Kontext der Signalübertragung in Immunzellen sowie allgemeiner ER‑assoziierter regulatorischer Netzwerke untersucht, die die Proteostase prägen. Fehlregulierte Calciumverarbeitung und ER‑Stress‑Signalwege, die mit CAML‑assoziierten Mechanismen zusammenlaufen, sind für unterschiedliche Krankheitsbiologien relevant, darunter Immunfunktionsstörungen und krebsassoziierte Signalanpassungen.
CAML Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAMLG-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAMLG abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAMLG-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAMLG-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.