CaMKV Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433479
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CaMKV El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CaMKV, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CaMKV Anticuerpo (2F3-1A2): sc-517082
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CaMKV Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-433479 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Camkv codifica CaMKV, una proteína atípica tipo quinasa similar a las quinasas dependientes de calmodulina, enriquecida en neuronas e implicada en la señalización dependiente de la actividad. Aunque se ha descrito que presenta una actividad catalítica limitada o atípica en comparación con las CaMK canónicas, CaMKV participa en redes reguladoras vinculadas a Ca2+/calmodulina que influyen en la señalización sináptica, la organización del citoesqueleto y la diferenciación neuronal. A través de estos procesos, Camkv se ha relacionado con vías que gobiernan el crecimiento de neuritas y la plasticidad, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del desarrollo y la disfunción del sistema nervioso. La regulación alterada de nodos de señalización sensibles al Ca2+ como CaMKV se explora con frecuencia en el contexto de fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos en sistemas modelo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CaMKV (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Camkv en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Camkv junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Camkv tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CaMKV.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Camkv para la investigación de la señalización de CaMKV, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Camkv críticos para la función de CaMKV
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Camkv para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CaMKV CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CaMKV CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Camkv. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CaMKV (m) y el plásmido HDR CaMKV (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Camkv para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Camkv definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.