Plásmido CRISPR de Activación (h) CaMKI: sc-401136-ACT

El gen humano **CAMK1** codifica **CaMKI**, una quinasa de serina/treonina dependiente de calcio/calmodulina que traduce señales intracelulares de Ca2+ en eventos de fosforilación que controlan programas transcripcionales, la dinámica del citoesqueleto y la progresión del ciclo celular. CaMKI se integra en redes de señalización Ca2+/CaM y puede acoplar la actividad neuronal a la expresión génica mediante cascadas de quinasas aguas abajo y vías asociadas a CREB, favoreciendo el crecimiento de neuritas y procesos relacionados con la plasticidad sináptica. Más allá del sistema nervioso, la actividad de CAMK1 se ha implicado en contextos de señalización más amplios que influyen en la proliferación y las respuestas al estrés, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la desregulación de la señalización observada en enfermedades complejas. La alteración de la señalización de quinasas dependientes de Ca2+ se asocia con frecuencia a fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, así como a la reprogramación de vías asociada al cáncer, lo que sitúa a **CAMK1** como un nodo útil para la interrogación de rutas.

CaMKI El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAMK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CaMKI El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAMK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAMK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CaMKI. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAMK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CaMKI en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CaMKI en células tumorales con expresión de CAMK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.