Plasmide CRISPR/Cas9 KO CaM III (h): sc-400953

Présentation

CALM3 code la calmoduline III (CaM III), un capteur de Ca2+ hautement conservé qui se lie à de nombreuses protéines effectrices et en régule l’activité, notamment des kinases et phosphatases dépendantes de la calmoduline, des canaux ioniques et des composants du cytosquelette. En convertissant les transitoires de calcium intracellulaire en modifications de l’activité enzymatique, CaM III soutient des processus fondamentaux tels que le couplage excitation–contraction, le trafic vésiculaire, la régulation transcriptionnelle et la progression du cycle cellulaire. La signalisation dépendante de CALM3 s’interface avec des voies telles que CaMK et calcineurine/NFAT, modulant l’expression génique en réponse aux stimuli et l’adaptation au stress cellulaire. Une signalisation calcium/calmoduline dérégulée a été associée à un remodelage pathologique dans des contextes cardiovasculaires et neurologiques, ce qui fait de la perturbation de CALM3 un outil utile pour des études mécanistiques de phénotypes pilotés par le Ca2+.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CaM III (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CALM3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CALM3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CALM3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CaM III.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CALM3 pour l'étude de la signalisation de CaM III, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CALM3 essentiels à la fonction de CaM III
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CALM3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CaM III plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CaM III plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CALM3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CaM III plasmide HDR (h) et le CaM III (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CALM3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CALM3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.