Plásmido CRISPR de Activación (h) CaM III: sc-400953-ACT

El gen humano **CALM3** codifica la **calmodulina III (CaM III)**, un sensor ubicuo de unión a Ca2+ que transduce las señales intracelulares de calcio en cambios coordinados en la actividad enzimática, la función de los canales iónicos y la expresión génica. Tras unirse al Ca2+, la CaM III modula efectores clave, entre ellos las **CaMK**, la **calcineurina** y las **fosfodiesterasas**, integrando la señalización relacionada con la excitabilidad neuronal, la conducción cardíaca, la secreción y la remodelación del citoesqueleto. Las vías dependientes de CALM3 convergen con los programas transcripcionales impulsados por **MAPK/ERK** y **CREB**, dando forma a la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. La desregulación de la señalización Ca2+/calmodulina se ha implicado en la susceptibilidad a arritmias, fenotipos del neurodesarrollo y la reprogramación de la señalización asociada al cáncer, lo que respalda su amplia relevancia en estudios mecanísticos.

CaM III El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CALM3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CaM III El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CALM3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CALM3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CaM III. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CALM3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CaM III en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CaM III en células tumorales con expresión de CALM3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.