calsyntenin-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425768

Descripción general

Clstn1 codifica la calsintenina-1, una proteína de membrana de tipo I enriquecida en neuronas que actúa como adaptador de carga, enlazando vesículas con motores de kinesina y coordinando el transporte anterógrado en axones y dendritas. Mediante interacciones con la proteína precursora de amiloide (APP), componentes sinápticos y la maquinaria de tráfico endosomal, la calsintenina-1 contribuye a la formación de sinapsis, al tráfico de receptores y a la conectividad neuronal dependiente de la actividad. La alteración del transporte dependiente de CLSTN1 y de la homeostasis sináptica se ha estudiado en el contexto de mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, incluidas vías implicadas en el procesamiento de APP relacionado con la enfermedad de Alzheimer. En sistemas murinos, Clstn1 se investiga con frecuencia para dilucidar cómo el transporte intracelular de largo alcance moldea el ensamblaje de circuitos, la plasticidad sináptica y la vulnerabilidad neuronal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO calsyntenin-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Clstn1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Clstn1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Clstn1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína calsyntenin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Clstn1 para la investigación de la señalización de calsyntenin-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Clstn1 críticos para la función de calsyntenin-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Clstn1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido calsyntenin-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido calsyntenin-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Clstn1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR calsyntenin-1 (m) y el plásmido HDR calsyntenin-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Clstn1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Clstn1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.