Plásmido CRISPR de Activación (m) calsequestrin 2: sc-419472-ACT

Mouse **Casq2** codifica **calsecuestrina 2**, una proteína luminal del retículo sarcoplásmico con alta capacidad de unión a Ca2+ que amortigua y organiza los depósitos de Ca2+ para sostener el acoplamiento excitación–contracción. Al modular el comportamiento del canal del receptor de rianodina (RYR2) y la cinética de liberación de Ca2+ inducida por Ca2+, CASQ2 influye en el ciclado de Ca2+, la refractariedad del RS y la estabilidad contráctil del miocito. La alteración de la homeostasis de Ca2+ dependiente de CASQ2 se asocia con mecanismos arritmogénicos desencadenados por el estrés y con programas alterados de señalización intracelular de Ca2+, lo que convierte a **Casq2** en un nodo clave en la investigación de la electrofisiología cardíaca y del manejo del calcio. En sistemas modelo, la modulación de **Casq2** se utiliza habitualmente para estudiar el amortiguamiento de Ca2+ en el RS, la dinámica de las chispas de Ca2+ y las respuestas de señalización posteriores a la alteración del flujo de Ca2+.

calsequestrin 2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Casq2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

calsequestrin 2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Casq2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Casq2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de calsequestrin 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Casq2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de calsequestrin 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía calsequestrin 2 en células tumorales con expresión de Casq2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.