calsequestrin 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403375

Descripción general

CASQ1 codifica la calsequestrina 1, una proteína de alta capacidad de unión a Ca²⁺ localizada en la luz del retículo sarcoplásmico en el músculo esquelético, donde amortigua el Ca²⁺ y ayuda a moldear el acoplamiento excitación–contracción. Al interactuar con complejos del receptor de rianodina y con componentes de la porción yuxtajuncional del retículo sarcoplásmico, CASQ1 sostiene la dinámica de liberación y recaptación de Ca²⁺ que gobierna la contractilidad, la resistencia a la fatiga y la homeostasis de las miofibras. La alteración del manejo de Ca²⁺ dependiente de CASQ1 se asocia con cambios en la señalización intracelular de Ca²⁺, respuestas de estrés oxidativo y remodelación de la arquitectura del retículo sarcoplásmico. Estudios genéticos y funcionales han implicado a CASQ1 en la susceptibilidad a fenotipos similares a la hipertermia maligna y a otros trastornos del músculo esquelético caracterizados por un almacenamiento deficiente de Ca²⁺ y una liberación de Ca²⁺ desregulada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO calsequestrin 1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CASQ1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CASQ1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CASQ1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína calsequestrin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CASQ1 para la investigación de la señalización de calsequestrin 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CASQ1 críticos para la función de calsequestrin 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CASQ1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido calsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido calsequestrin 1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CASQ1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR calsequestrin 1 (h) y el plásmido HDR calsequestrin 1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CASQ1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CASQ1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.