Plásmido CRISPR de Activación (h) calsequestrin 1: sc-403375-ACT

CASQ1 codifica la calsequestrina 1, una proteína de alta capacidad de unión a Ca2+ localizada en el lumen del retículo sarcoplásmico en el músculo esquelético de contracción rápida. Al amortiguar y liberar Ca2+ luminal, la calsequestrina 1 sostiene el acoplamiento excitación–contracción y ayuda a modular la dinámica de liberación de Ca2+ mediada por el receptor de rianodina, influyendo en la homeostasis del calcio, la contractilidad muscular y la estabilidad de los depósitos de Ca2+ del RS. La alteración de la función de CASQ1 se ha vinculado con cambios en la señalización intracelular de Ca2+ y en las respuestas al estrés en el músculo esquelético, lo que aporta un punto de entrada mecanístico para estudiar vías dependientes de Ca2+, la proteostasis y la fisiología de las miofibras. Como regulador central del amortiguamiento de Ca2+ en el RS, CASQ1 se examina con frecuencia en modelos de disfunción muscular en los que un manejo anómalo del Ca2+ contribuye a la patología.

calsequestrin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CASQ1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

calsequestrin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CASQ1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CASQ1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de calsequestrin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CASQ1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de calsequestrin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía calsequestrin 1 en células tumorales con expresión de CASQ1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.