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Calregulin双切口酶质粒(h) | sc-400775-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calregulin双切口酶质粒(h2) | sc-400775-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 CALR 基因编码钙网蛋白(calreticulin),它是一种位于内质网腔内的分子伴侣及高容量 Ca²⁺ 结合蛋白,可通过钙连蛋白/钙网蛋白循环以及内质网相关降解(ERAD)支持糖蛋白折叠与质量控制。钙网蛋白参与调控细胞内钙稳态,并与内质网应激信号及未折叠蛋白反应(UPR)相互作用;通过改变依赖钙的信号传导,进而影响细胞凋亡、细胞黏附以及免疫相关过程。CALR 活性失调与癌症生物学中的蛋白质稳态异常和应激适应改变有关;同时也与骨髓增殖性肿瘤相关的 CALR 突变有关,这些突变会扰乱下游信号网络。上述特性使 CALR 成为一个常被研究的关键节点,用以连接内质网蛋白质稳态、钙信号与细胞应激反应。
Calregulin 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 CALR 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CALR内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏CALR的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了CALR基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。