Calregulin Plasmide Double Nickase (h): sc-400775-NIC

Il gene umano **CALR** codifica la **calreticulina**, uno chaperone luminale del reticolo endoplasmatico e una proteina con elevata capacità di legare **Ca²⁺**, che sostiene il ripiegamento delle glicoproteine e il controllo qualità attraverso il ciclo calnexina/calreticulina e la degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD). La calreticulina regola l’omeostasi del calcio intracellulare e interagisce con la segnalazione dello stress del RE e con la risposta alle proteine mal ripiegate (UPR), influenzando apoptosi, adesione cellulare e processi immuno-correlati tramite variazioni della segnalazione calcio-dipendente. Un’attività deregolata di **CALR** è stata collegata ad alterazioni della proteostasi e dell’adattamento allo stress nella biologia dei tumori, nonché a mutazioni di **CALR** associate alle neoplasie mieloproliferative che perturbano le reti di segnalazione a valle. Queste caratteristiche rendono **CALR** un nodo comunemente studiato che collega proteostasi del RE, segnalazione del calcio e risposte cellulari allo stress.

Calregulin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CALR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CALR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CALR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CALR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.