Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) Calpastatin: sc-401502-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Calpastatin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Calpastatin Double Nickase (h) et le plasmide Calpastatin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CAST. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Calpastatin Antibody (A-1): sc-376547
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Calpastatin | sc-401502-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Calpastatin | sc-401502-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain CAST code la calpastatine, l’inhibiteur endogène et hautement spécifique des protéases à cystéine dépendantes du calcium, la calpaïne‑1 et la calpaïne‑2. En limitant la protéolyse restreinte médiée par les calpaïnes, la calpastatine contribue à réguler le remodelage du cytosquelette, le renouvellement des adhérences focales, le trafic membranaire et des événements de transduction du signal liés à la dynamique du Ca2+ et aux cascades de phosphorylation. L’activité de CAST influence la protéostasie et les programmes de survie cellulaire en modulant le clivage de substrats impliqués dans l’apoptose, l’inflammation, ainsi que l’homéostasie neuronale et musculaire. Un déséquilibre de l’axe calpaïne–calpastatine a été associé à des voies pertinentes pour la neurodégénérescence, les réponses aux lésions cardiovasculaires et l’invasion des cellules cancéreuses, ce qui fait de CAST un nœud mécanistique d’intérêt pour l’étude de la protéolyse régulée par le Ca2+.
Calpastatin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAST dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAST. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAST. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAST.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.