Calpain 6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407700-ACT

O CAPN6 humano codifica a calpaína 6, um membro atípico da família das calpaínas, com atividade protease limitada ou ausente, que atua principalmente como regulador da organização do citoesqueleto. A calpaína 6 está associada à estabilização de microtúbulos, ao controle da forma celular e à modulação da motilidade e da adesão celulares — processos que se cruzam com vias que regulam a diferenciação e a remodelação tecidual. A expressão de CAPN6 é frequentemente estudada em contextos de programas de desenvolvimento e de respostas ao estresse celular, nos quais alterações na dinâmica do citoesqueleto impactam fenótipos proliferativos e migratórios. Foi relatado que a desregulação de CAPN6 aparece em diversas assinaturas transcriptômicas associadas a doenças, sustentando seu uso como um nó mecanístico para investigar a remodelação dependente do citoesqueleto e estados de crescimento aberrantes.

Calpain 6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAPN6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calpain 6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAPN6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAPN6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calpain 6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAPN6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calpain 6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calpain 6 em células tumorais com expressão de CAPN6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.