Plasmide Double Nickase (m) Calnexin: sc-419436-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Calnexin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Calnexin Double Nickase (m) et le plasmide Calnexin Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Canx. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Calnexin Antibody (AF18): sc-23954
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Calnexin | sc-419436-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Calnexin | sc-419436-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Canx** code la **calnexine**, une chaperonne lectine résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui se lie aux **glycanes N-liés monoglucosylés** afin de favoriser le repliement et le contrôle qualité des glycoprotéines naissantes. La calnexine fonctionne au sein du **cycle calnexine/calréticuline**, en coordination avec **ERp57** et des oxydoréductases apparentées, reliant la maturation des glycoprotéines à la **dégradation associée au RE (ERAD)** et à la **réponse aux protéines mal repliées (UPR)**. En régulant le trafic et la stabilité des protéines membranaires et sécrétées, la calnexine influence la protéostasie, la gestion du stress oxydant et la biogenèse de récepteurs liés à l’immunité. Un contrôle qualité dépendant de la calnexine dérégulé a été associé, dans des modèles expérimentaux, à des phénotypes de stress du RE et à des modifications des sorties de signalisation pertinentes pour la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques et les voies inflammatoires.
Calnexin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Canx dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Canx. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Canx. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Canx.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.