Calnexin Plasmide Double Nickase (m): sc-419436-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Calnexin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Calnexin Double Nickase Plasmid (m) e il Calnexin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Canx. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Calnexin Antibody (AF18): sc-23954
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Calnexin Plasmide Double Nickase (m) | sc-419436-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calnexin Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419436-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Canx** codifica la calnexina, uno chaperone lectinico residente nel reticolo endoplasmatico (RE) che si lega ai glicani N-linked monoglucosilati per promuovere il ripiegamento e il controllo qualità delle glicoproteine nascenti. La calnexina funziona all’interno del ciclo calnexina/calreticulina in coordinamento con ERp57 e ossidoreduttasi correlate, collegando la maturazione delle glicoproteine alla degradazione associata al RE (ERAD) e alla risposta alle proteine mal ripiegate (UPR). Regolando il traffico e la stabilità di proteine di membrana e secrete, la calnexina influenza la proteostasi, la gestione dello stress ossidativo e la biogenesi di recettori implicati nella risposta immunitaria. Un controllo qualità dipendente dalla calnexina deregolato è stato associato, in modelli sperimentali, a fenotipi di stress del RE e ad alterazioni degli output di segnalazione rilevanti per neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e vie infiammatorie.
Calnexin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Canx nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Canx. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Canx. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Canx interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.