Plasmide CRISPR/Cas9 KO Calgranulin B (h): sc-400801

Présentation

S100A9 code la calgranuline B, une protéine de la famille S100 liant le calcium, qui forme des hétérodimères avec S100A8 et est fortement exprimée dans les neutrophiles et les monocytes inflammatoires. La calgranuline B régule la signalisation de l’immunité innée et le trafic leucocytaire via des interactions avec des récepteurs de reconnaissance de motifs (PRR) tels que TLR4 et RAGE, en amplifiant les programmes de cytokines et de chimiokines contrôlés par NF-κB/MAPK. Elle contribue aux réponses antimicrobiennes, à la régulation du stress oxydant et à l’activation des cellules myéloïdes, et est fréquemment étudiée comme marqueur et médiateur de l’inflammation aiguë et chronique. Une expression dérégulée de S100A9 a été associée à des troubles inflammatoires et à des programmes myéloïdes liés au cancer, notamment le recrutement et la polarisation fonctionnelle de populations myéloïdes suppressives dans le microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Calgranulin B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène S100A9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du S100A9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert S100A9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Calgranulin B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en S100A9 pour l'étude de la signalisation de Calgranulin B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de S100A9 essentiels à la fonction de Calgranulin B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de S100A9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Calgranulin B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Calgranulin B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus S100A9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Calgranulin B plasmide HDR (h) et le Calgranulin B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie S100A9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles S100A9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.