cadherin-24 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401990-ACT

CDH24 kodiert Cadherin-24, ein calciumabhängiges Zell-Zell-Adhäsionsprotein, das über cadherinvermittelte Adherens Junctions zur Organisation und Stabilität epithelialer Zellkontakte beiträgt. Durch die Unterstützung homophiler Interaktionen an der Plasmamembran und die Ankopplung an zytoskelettale Netzwerke über cateninassoziierte Komplexe kann Cadherin-24 die Gewebearchitektur, Polarität und kontaktabhängige Signalübertragung beeinflussen. Veränderte Cadherin-Expressionsmuster werden häufig mit Änderungen der zellulären Kohäsion und des Migrationsverhaltens in Verbindung gebracht, wodurch CDH24 ein nützliches Ziel für die Untersuchung von Adhäsionsumbauprozessen in Entwicklung und krankheitsassoziierten Phänotypen ist. Eine Dysregulation von CDH24 wurde in Kontexten untersucht, in denen die epitheliale Integrität und junctionale Signalwege gestört sind, und bietet damit einen funktionellen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zu Zelladhäsionswegen.

cadherin-24 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDH24-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

cadherin-24 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDH24-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDH24-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen cadherin-24-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDH24-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von cadherin-24-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des cadherin-24-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDH24-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.