cadherin-20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401925-ACT

PCDHGB4 codifica a caderina-20, um membro da família das protocaderinas implicado na adesão célula–célula dependente de cálcio e na organização de complexos de reconhecimento na superfície celular. As protocaderinas contribuem para o padrão tecidual e a manutenção da arquitetura celular ao modular a estabilidade das junções e a sinalização dependente de contato, com efeitos a jusante na dinâmica do citoesqueleto e em programas de expressão gênica. Alterações na expressão de caderinas e protocaderinas têm sido associadas a estados desregulados de adesão, migração e diferenciação, relevantes para distúrbios do desenvolvimento e processos oncogênicos. Como parte da rede mais ampla de caderinas, a caderina-20 é frequentemente estudada no contexto da sinalização mediada por adesão e da regulação transcricional específica de linhagem.

cadherin-20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCDHGB4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cadherin-20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCDHGB4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCDHGB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cadherin-20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCDHGB4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cadherin-20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cadherin-20 em células tumorais com expressão de PCDHGB4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.