Plásmido Doble Nickase (h) Cacna2d1: sc-402833-NIC

CACNA2D1 codifica la subunidad auxiliar α2δ-1 de los canales de calcio dependientes de voltaje, un regulador clave del tráfico de los canales, la estabilidad de la membrana y la compuerta (gating), que determina la entrada de calcio durante la excitabilidad y el acoplamiento estímulo–secreción. Al modular la función de los canales CaV, Cacna2d1 influye en cascadas de señalización dependientes de calcio que afectan la liberación de neurotransmisores, la contracción muscular y la expresión génica dependiente de la actividad. La alteración de la expresión de CACNA2D1 o de la regulación del complejo del canal se ha relacionado con una electrofisiología desregulada y procesos de remodelación relevantes en contextos de investigación neurológica y cardiovascular. Como componente del complejo del canal expuesto en la superficie, Cacna2d1 también resulta útil para dilucidar cómo las interacciones extracelulares y las modificaciones postraduccionales ajustan la disponibilidad de los canales de calcio.

Cacna2d1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CACNA2D1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CACNA2D1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CACNA2D1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CACNA2D1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.