Plasmide CRISPR d'Activation (h) CA XII: sc-404149-ACT

Le gène humain **CA12** code l’anhydrase carbonique XII (CA XII), une métallozinc enzyme associée à la membrane qui catalyse de manière réversible l’hydratation du CO₂ en bicarbonate et en protons, contribuant ainsi à la régulation du pH extracellulaire et péricellulaire. En contrôlant la disponibilité du bicarbonate et les flux de protons, CA XII influence le transport ionique, la dynamique de l’adhérence cellulaire et l’adaptation métabolique dans des microenvironnements hypoxiques ou acides. L’activité de CA XII s’inscrit dans des réseaux de signalisation et de transport dépendants du pH, notamment les transporteurs de bicarbonate et des processus couplés aux protons qui modèlent l’équilibre rédox et la physiologie glycolytique. Une expression altérée de **CA12** a été rapportée dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, où une homéostasie du pH dérégulée et l’acidification du microenvironnement contribuent aux réponses cellulaires au stress et à la plasticité phénotypique.

CA XII Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CA12 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CA XII Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CA12 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CA12, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CA XII. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CA12 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CA XII au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CA XII dans les cellules tumorales présentant une expression de CA12 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.