Plasmide CRISPR/Cas9 KO CA XI (m): sc-419451

Présentation

La Car11 murine code l’anhydrase carbonique XI (CA XI), un membre de la famille des anhydrases carboniques, que l’on pense contribuer à la régulation du pH cellulaire ainsi qu’à la gestion du bicarbonate/CO₂ au sein de microenvironnements métaboliques, bien que son activité catalytique soit décrite comme atypique par rapport aux anhydrases carboniques classiques. L’expression de CA XI a été associée aux tissus neuronaux, ce qui implique Car11 dans des processus liés à la physiologie neuronale et à l’homéostasie des ions et du pH. Par ses effets sur l’équilibre acido-basique intra- et extracellulaire, Car11 pourrait interagir avec des voies influençant le métabolisme cellulaire, la différenciation et l’adaptation au microenvironnement. Une régulation anormale du pH et des modifications de l’expression de la famille des anhydrases carboniques sont pertinentes pour les études de neurobiologie et du remodelage métabolique associé aux maladies dans des modèles expérimentaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CA XI (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Car11 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Car11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Car11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CA XI.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Car11 pour l'étude de la signalisation de CA XI, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Car11 essentiels à la fonction de CA XI
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Car11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CA XI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CA XI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Car11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CA XI plasmide HDR (m) et le CA XI (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Car11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Car11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.