Plásmido Doble Nickase (h) CA VI: sc-405565-NIC

La anhidrasa carbónica VI (CA VI), codificada por el gen humano CA6, es una metaloenzima secretada dependiente de zinc que cataliza la hidratación reversible del CO₂ para formar bicarbonato y protones, contribuyendo a la homeostasis del pH extracelular y a la capacidad tampón en la saliva y otras secreciones glandulares. Al regular el equilibrio ácido–base local, la CA VI influye en procesos vinculados a la química de la superficie mucosa, a la dinámica de desmineralización/remineralización del esmalte y a las condiciones microambientales que moldean las interacciones huésped–microbioma. La alteración de la expresión de CA6 y de la actividad de CA VI se ha asociado con variaciones en rasgos fisiológicos orales, incluida la capacidad tampón salival y la susceptibilidad a cambios tisulares dependientes del pH, lo que respalda su utilidad como lectura molecular de la función de las glándulas secretoras y de la homeostasis epitelial. Estas características hacen de CA6 una diana relevante para estudios mecanísticos sobre la biología de las anhidrasas carbónicas extracelulares, la señalización regulada por el pH y la contribución de enzimas secretadas a microambientes adyacentes a barreras.

CA VI El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CA6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CA6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CA6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CA6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.