Plásmido CRISPR de Activación (h) CA III: sc-403538-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) CA III es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) CA III incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR CA III (h) y el plásmido de activación CRISPR CA III (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de CA3. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CA III Anticuerpo (F-10): sc-373729
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) CA III | sc-403538-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen humano CA3 codifica la anhidrasa carbónica III (CA III), una metaloenzima citosólica de zinc que cataliza la hidratación reversible del CO₂ a bicarbonato y protones, contribuyendo al tamponamiento del pH intracelular y al flujo de carbono. La CA III se expresa en niveles altos en el músculo esquelético y otros tejidos oxidativos, donde se relaciona con la homeostasis metabólica, el equilibrio redox y las respuestas al estrés oxidativo a través de residuos de cisteína reactivos y la S-glutationilación. Se han reportado alteraciones en la expresión de CA3 en contextos de fisiología muscular y remodelación metabólica, lo que respalda su uso como un indicador molecular en estudios de miopatía, metabolismo energético y programas de adaptación al estrés. Como componente de la regulación ácido-base mediada por anhidrasas carbónicas, la CA III constituye un punto accesible para investigar cómo la dinámica del pH influye en la actividad enzimática, la proteostasis y la aptitud celular.
CA III El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
CA III El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CA III. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CA III en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CA III en células tumorales con expresión de CA3 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.