C8A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406590

Descripción general

C8A codifica la cadena alfa del componente 8 del complemento, una subunidad esencial del complejo terminal del complemento (C5b-9) que impulsa la formación del complejo de ataque a la membrana (MAC) y la lisis de las células diana. Como parte del sistema inmunitario innato, C8A participa en la cascada del complemento aguas abajo de la activación de las vías clásica, de las lectinas y alternativa, influyendo en la opsonización, la señalización inflamatoria y la eliminación de complejos inmunes. La alteración de los componentes terminales del complemento se asocia con una defensa del huésped desregulada y una susceptibilidad modificada a las infecciones, y la actividad del complemento también está implicada en el daño tisular inflamatorio y asociado a enfermedades autoinmunes. Por ello, C8A es relevante para estudios de citotoxicidad mediada por el complemento, actividad bactericida del suero y mecanismos que controlan la homeostasis inmunitaria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C8A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C8A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C8A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C8A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C8A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C8A para la investigación de la señalización de C8A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de C8A críticos para la función de C8A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C8A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C8A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido C8A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C8A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C8A (h) y el plásmido HDR C8A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C8A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C8A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.