C8A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406590

Panoramica

C8A codifica la catena alfa del componente 8 del complemento, una subunità fondamentale del complesso terminale del complemento (C5b-9) che promuove la formazione del complesso di attacco alla membrana (MAC) e la lisi delle cellule bersaglio. Come parte del sistema immunitario innato, C8A partecipa alla cascata del complemento a valle dell’attivazione delle vie classica, lectinica e alternativa, influenzando l’opsonizzazione, la segnalazione infiammatoria e la rimozione dei complessi immuni. L’alterazione dei componenti terminali del complemento è associata a una difesa dell’ospite deregolata e a una diversa suscettibilità alle infezioni; inoltre, l’attività del complemento è implicata nel danno tissutale legato a processi infiammatori e autoimmuni. C8A è quindi rilevante per studi sulla citotossicità mediata dal complemento, sull’attività battericida del siero e sui meccanismi che controllano l’omeostasi immunitaria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C8A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C8A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C8A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C8A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C8A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C8A per lo studio della segnalazione di C8A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C8A critici per la funzione di C8A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C8A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C8A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C8A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C8A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C8A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C8A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C8A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C8A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.