C6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419396
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- C6 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico C6, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: C6 Anticuerpo (3G11): sc-66191
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
C6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419396 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El C6 murino codifica el componente del complemento C6, una proteína de la vía terminal necesaria para el ensamblaje del complejo de ataque a la membrana (MAC, C5b-9), que forma poros líticos en las membranas diana. Tras la activación del complemento a través de las vías clásica, de las lectinas o alternativa, C6 se une a C5b e inicia el reclutamiento de C7, C8 y C9, conectando la opsonización y la señalización inflamatoria con el daño directo de membrana. La actividad de C6 influye en la vigilancia inmunitaria innata, las interacciones huésped–patógeno y la regulación de los microambientes inflamatorios. La actividad desregulada del complemento terminal se ha asociado con lesión tisular inflamatoria y mediada por el sistema inmunitario, lo que convierte a C6 en una diana útil para estudios mecanísticos de la patología impulsada por el complemento.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO C6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C6.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C6 para la investigación de la señalización de C6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de C6 críticos para la función de C6
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido C6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido C6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C6 (m) y el plásmido HDR C6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.