C4a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402428

Descripción general

El componente 4A del complemento (C4A) codifica el fragmento C4a generado durante la activación proteolítica del complemento C4, un paso central en las vías clásica y de las lectinas del complemento. La escisión de C4 favorece la formación de la convertasa de C3 y promueve procesos posteriores de opsonización, señalización inflamatoria y eliminación de complejos inmunes. La variación en el número de copias y en la expresión de C4A se ha asociado con desregulación inmunitaria y actividad del complemento alterada, con relevancia para la autoinmunidad y fenotipos vinculados a la neuroinflamación. Como lectura de la activación del complemento, C4a se utiliza comúnmente para estudiar la comunicación cruzada de la inmunidad innata con las respuestas adaptativas y los mecanismos de lesión tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C4a (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C4A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C4A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C4A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C4a.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C4A para la investigación de la señalización de C4a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de C4A críticos para la función de C4a
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C4A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C4a CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido C4a CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C4A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C4a (h) y el plásmido HDR C4a (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C4A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C4A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.