Plásmido CRISPR de Activación (h) C3aR: sc-401448-ACT

C3AR1 codifica el receptor 1 del componente 3a del complemento (C3aR), un receptor acoplado a proteína G que se une a la anafilotoxina C3a para conectar la activación del complemento con la señalización celular. La activación de C3aR desencadena vías que incluyen el flujo de calcio mediado por Gαi/Gαq, MAPK/ERK y la señalización de PI3K, modulando la quimiotaxis de leucocitos, la liberación de citocinas y la activación de células mieloides. Este receptor integra el reconocimiento inmunitario innato con la amplificación de la inflamación y puede influir en la activación endotelial y la remodelación tisular. La actividad desregulada de C3AR1 se ha implicado en la biología de enfermedades inflamatorias y mediadas por el sistema inmunitario, lo que respalda su estudio en modelos de inflamación crónica y de patología impulsada por el microambiente.

C3aR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C3AR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C3aR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C3AR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C3AR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C3aR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C3AR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C3aR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C3aR en células tumorales con expresión de C3AR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.