Plásmido CRISPR de Activación (h) C3: sc-400622-ACT

El componente 3 del complemento humano (C3) es un nodo central de la cascada del complemento, generado como un zimógeno secretado que se escinde proteolíticamente en C3a y C3b para amplificar las respuestas inmunitarias innatas. C3b opsoniza covalentemente a las dianas para promover la fagocitosis y la eliminación de complejos inmunes, mientras que C3a actúa como una anafilotoxina que modula el reclutamiento de leucocitos y la señalización inflamatoria. Mediante la integración de las vías clásica, de las lectinas y alternativa, C3 regula la defensa del huésped, la poda sináptica y la comunicación cruzada con las redes de coagulación y citocinas. La actividad o el procesamiento desregulados de C3 se han implicado en inflamación mediada por el complemento y lesión tisular, con relevancia para enfermedades autoinmunes, la biología de las infecciones y afecciones neuroinflamatorias y degenerativas.

C3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C3 en células tumorales con expresión de C3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.