C20orf160 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-414493

Descripción general

CCM2L (C20orf160) codifica una proteína tipo andamiaje relacionada con CCM2, implicada en la señalización endotelial y la estabilidad vascular mediante interacciones con componentes de la vía de CCM. Se ha vinculado con la regulación de la señalización MAPK y de la organización del citoesqueleto, procesos que influyen en la integridad de las uniones célula–célula, la mecanotransducción y las respuestas a señales inflamatorias. Estudios de expresión y funcionales sugieren su relevancia en la angiogénesis y el desarrollo cardiovascular, con posibles conexiones con la biología de las malformaciones cavernosas cerebrales a través del solapamiento de vías más que por una anotación patogénica directa. En consecuencia, CCM2L se investiga con frecuencia en modelos de homeostasis endotelial, función de barrera y redes de señalización sensibles al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C20orf160 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCM2L en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCM2L junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCM2L tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C20orf160.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCM2L para la investigación de la señalización de C20orf160, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CCM2L críticos para la función de C20orf160
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCM2L para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C20orf160 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido C20orf160 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCM2L. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C20orf160 (h) y el plásmido HDR C20orf160 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCM2L para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCM2L definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.