C2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419389

Descripción general

El componente 2 del complemento (C2) es un cimógeno central de serina proteasa de las vías clásica y de las lectinas del complemento en el ratón. Es escindido por C1s o MASP2 para generar C2a y formar la convertasa de C3 (C4b2a). Este paso impulsa la amplificación de la activación del complemento, la opsonización, la señalización inflamatoria y la formación posterior del complejo de ataque a la membrana, vinculando el reconocimiento inmunitario innato con la eliminación de complejos inmunes y patógenos. La actividad de C2 interactúa con redes de citocinas y con respuestas dependientes de receptores Fc, modulando el reclutamiento de leucocitos y la presentación de antígenos en tejidos inmunitarios. La alteración de la función de C2 es ampliamente relevante para estudios de desregulación del complemento asociada con autoinmunidad, susceptibilidad a infecciones y mecanismos de lesión tisular inflamatoria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C2 para la investigación de la señalización de C2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de C2 críticos para la función de C2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido C2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C2 (m) y el plásmido HDR C2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.