Plasmide Double Nickase (h) C1s: sc-404794-NIC

C1S code le composant du complément C1s, une sérine protéase modulaire qui agit au sein du complexe C1 pour initier la voie classique du complément. Après activation, C1s clive C4 et C2 afin de générer la convertase C3, reliant la reconnaissance des complexes immuns aux étapes en aval d’opsonisation et de signalisation inflammatoire. L’activité de C1s s’articule également avec des cascades protéolytiques, le traitement de protéines extracellulaires et la régulation de l’immunité innée, modulant les réponses cytokiniques et l’élimination du matériel apoptotique. Une activation dérégulée de la voie classique du complément, ainsi que des variants génétiques affectant C1S, ont été associés à une inflammation à médiation immune, à une susceptibilité aux infections récidivantes et à des phénotypes de lésions tissulaires dépendantes du complément, ce qui souligne sa pertinence pour la recherche en immunologie et en biologie vasculaire.

C1s Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus C1S dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de C1S. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de C1S. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de C1S.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.