Plasmide CRISPR/Cas9 KO C19orf12 (h): sc-406640

Présentation

C19orf12 code une petite protéine associée aux mitochondries, impliquée dans la gestion des lipides et le maintien de l’homéostasie mitochondriale, avec des liens avec les réponses cellulaires au stress oxydatif et le métabolisme du fer. Des études fonctionnelles relient C19orf12 à la biologie des membranes mitochondriales et à des processus qui influencent la production d’énergie, l’équilibre rédox et les voies de contrôle qualité des organites, telles que la mitophagie. L’altération de C19orf12 est associée à la neurodégénérescence avec accumulation de fer dans le cerveau (NBIA), soulignant sa pertinence pour les mécanismes de vulnérabilité neuronale, la dysrégulation du fer et le dysfonctionnement mitochondrial. Ainsi, C19orf12 est fréquemment étudié dans des modèles qui explorent la signalisation du stress mitochondrial, le remodelage lipidique et les voies de la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C19orf12 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C19orf12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C19orf12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C19orf12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C19orf12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C19orf12 pour l'étude de la signalisation de C19orf12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C19orf12 essentiels à la fonction de C19orf12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C19orf12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C19orf12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C19orf12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus C19orf12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C19orf12 plasmide HDR (h) et le C19orf12 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C19orf12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C19orf12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.