C17orf59 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412334

Descripción general

BORCS6 (C17orf59) es un componente central del BORC (complejo relacionado con BLOC-1) que regula el posicionamiento y el transporte anterógrado de los lisosomas a lo largo de los microtúbulos, modelando la distribución de los orgánulos y los procesos periféricos dependientes de lisosomas. Mediante el acoplamiento dependiente de BORC a Arl8 y a los motores de quinesina, C17orf59 contribuye a la dinámica del tráfico endolisosomal que influye en la función autofagia-lisosoma, la señalización de nutrientes y la remodelación de membranas. La alteración de la actividad de BORC puede perturbar la dispersión de los lisosomas y el manejo de carga, vinculando esta vía con respuestas al estrés celular y con fenotipos relevantes para la neurobiología y la función de las células inmunitarias. Como gen humano implicado en la logística de orgánulos, BORCS6 se estudia con frecuencia en el contexto del transporte intracelular, el metabolismo impulsado por lisosomas y los defectos de tráfico asociados a mecanismos complejos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C17orf59 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BORCS6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BORCS6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BORCS6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C17orf59.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BORCS6 para la investigación de la señalización de C17orf59, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BORCS6 críticos para la función de C17orf59
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BORCS6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C17orf59 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido C17orf59 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BORCS6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C17orf59 (h) y el plásmido HDR C17orf59 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BORCS6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BORCS6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.