Plásmido CRISPR de Activación (h) C16orf74: sc-408367-ACT

C16orf74 codifica una proteína humana poco caracterizada y con una anotación funcional limitada, y la evidencia actual sugiere que podría participar en la regulación dependiente del contexto de la expresión génica y del estado celular. Estudios a nivel de transcritos informan una expresión variable de C16orf74 entre tejidos y sistemas experimentales, lo que respalda su uso como marcador para explorar programas transcripcionales asociados con la diferenciación y el estrés. Aunque su ubicación definitiva en vías de señalización aún no está completamente establecida, C16orf74 se evalúa con frecuencia en conjuntos de datos multi-ómicos para identificar redes co-reguladas vinculadas con la proliferación, la señalización de supervivencia y la identidad celular. Se han observado cambios en su expresión en firmas de expresión relevantes para enfermedades, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos en modelos celulares, sin que ello implique utilidad clínica.

C16orf74 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C16orf74 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C16orf74 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C16orf74 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C16orf74, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C16orf74. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C16orf74 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C16orf74 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C16orf74 en células tumorales con expresión de C16orf74 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.