c-Rel Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422641-LAC

Mouse Rel codifica c-Rel, un membro della famiglia di fattori di trascrizione NF-κB che regola programmi genici dipendenti dallo stimolo, controllando l’attivazione dei linfociti, la produzione di citochine, la sopravvivenza cellulare e la differenziazione. c-Rel viene attivato a valle dei recettori dell’antigene, dei recettori Toll-like e della segnalazione del recettore del TNF tramite fosforilazione mediata da IKK e degradazione proteasomiale degli inibitori IκB, consentendo la traslocazione nucleare e il legame a promotori/enhancer. La sua attività modella vie infiammatorie e di regolazione immunitaria, inclusi il controllo a feedback della segnalazione NF-κB e il coordinamento con le reti AP-1 e IRF. Una segnalazione di c-Rel deregolata è stata collegata ad attivazione immunitaria aberrante e patologia infiammatoria, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici in immunologia e in modelli di segnalazione rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale c-Rel (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Rel in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale c-Rel (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Rel, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di c-Rel. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Rel e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.